ميكروبيولوجيا المياه water microbiology
========================
إن مجموعه الأمراض التي تسببها مجموعه القولون نفسها:
=============================
Escherichia والتي يفرز منها الإنسان حوالي 200 مليون خلية وتسبب التهاب للجهاز البولي للإنسان ،كما تسبب الإسهال عند الأطفال ولاجراء الاختبارات نقوم بما يلي :
أولا: عد البكتيريا الكلية في عينة المياه بطريفة التخفيفات :
طريقة اخذ عينة المياه:
===========
طريقة العمل:
1- ترج عينة المياه جيدا 25 مرة (وذلك لضمان توزيع البكتيريا في العينة)
2- ينقل بماصة معقمة 1 مل من عينة المياه إلى أنبوبة محتوية على 9 مل ماء مقطر معقم فيصبح التخفيف 10/1
3- يرج التخفبف10/1 جيدا وبواسطة ماصة معقمة جديدة ينقل 1 مل إلى 2 طبق بتري معقم يمثل التخفيف10/ 1 وبنفس الماصة ينقل 1مل أخرى من الأنبوبة 10/1 إلى أنبوبة ماء مقطر معقم 9مل لنحصل على التخفيف 100/1
4- يرج التخفيف 100/1 جيدا وبواسطة ماصة معشقة جديدة ينقل 1 مل إلى 2 طبق بتري معقم يمثل التخفيف 100/1 وبنفس الماصة ينقل 1 مل أخرى من الأنبوبة 100/1 إلى أنبوبة ماء مقطر فيها 9 مل لنحصل على التخفيف 100/1
5- رج الأنبوبة جيدا ثم انقل 1 مل بواسطة ماصة معقمة جديدة من التخفيف 100/1 إلى 2 طبق بتري معقم لتمثل التخفيف 100/1
6- توزع عينة المياه في الاجار المغذي وتترك حتى تتصلب
7- تحضن الإطباق مقلوبة في الحضان على درجة حرارة 37ْم لمدة 48ساعة
8- تحسب عدد المستعمرات في الطبق الواحد لكل تخفيف"تعتمد الخفيفات التي تتراوح عدد المستعمرات فيها مابين 30-300 مستعمرة" ومنه احسب عدد الخلايا الحية في 1 مل من عينة المياه الأصلية، وذلك بضرب متوسط عدد المستعمرات في الطبق في مقلوب التخفيف المستخدم
9- نستخدم القانون التالي :
============
عدد الخلايا الحية في 1مل من عينة المياه الأصلية=
متوسط عدد المستعمرات في الطبق×مقلوب التخفيف المستخدم
1- تعد المستعمرة ( أقل من 30 مستعمرة تستبعد وأكثر من 300 )
إن تقدير العدد الكلي للبكتريا في عينة المياه لاتكفي في الحكم على صلاحية المياه للاستهلاك الآدمي وذلك لسببين: إن التجربة السابقة"عد البكتيريا الكلية عينة المياه بطريقة التخفيفات" لاتعطي سوى جزء من العدد الكلي للبكتيريا إذ إن معظم الميكروبات الموجودة في الماء لاتنمو على البيئات المعملية, وكما أن هذه الأعداد ليس بالضرورة إن تكون ممثلة للميكروبات الممرضة وليست معيارا مثاليا لسلامة مياه الشرب حيث يمكن إن توجد عينة ماء محتوية على عدد قليل من الأحياء الدقيقة ولكنها ممرضة..ولذلك فان الاعتماد على تقدير العدد الكلي للميكروبات في تقييم صلاحية المياه للاستهلاك الآدمي يكون غير مجدي...
واشعر أفراد مجموعة القولون بكتريا E.coli.وهي عبارة عن ميكروبات عصوية لاهوائية غير متجرثمة سالبة بجرام ،تخمر سكر اللاكتوز مع إنتاج حمض وغاز ،ونظرا لوجود هذه المجموعة بكميات كبيرة في مياه المجاري فان وجودها يدل على المياه بمياه المجاري.
ولإثبات وجود بكتيرياE.coli في المياه يجب إجراء الفحوص التالية وبالترتيب:
=====================================
1. الفحص الاحتمالي Presumptive:
2. الفحص التأكيدي Contirmed Test:
إذا كان هناك تشابه بين مستعمرات صغيرة، دائرية ومرتفعة قليلا وقطرها من 3-2مم ذات مركز اسود ولمعان معدني مخضر.فهذا يدل على وجود بكتيريا E.coli إما إذا كانت المستعمرات المشكوك فيها أظهرت أشكال مختلفة عن E.coli أي لم يحدث تشابه بين مستعمرات المشكوك فيها E.coli
وفكرة هذا الاختبار هو تكوين البيئة من معقد صبغي من EosineوMethylene blue لايمتص إلا في الوسط لحامضي الذي توفره E.coli من تحليلها لسكر اللاكتوز الموجود بالبيئة إلى حامض يوفر الظروف المناسبة لامتصاص المعقد الصبغي.
3. الفحص النهائي completed Test:
====================
س)) استخدام بيئة مرق الماكونكي؟
وذلك لان بيئة مرق الماكونكي تحتوي على دليل،هذا الدليل أو الكاشف في الوسط القاعدي يكون لونه احمر إما في الوسط لحامضي يكون لونه اصفر (تغير الاون من الأحمر إلى الاصفريدل على إنتاج الحمض ،هذه البيئة أيضا تحتوي على سكر اللاكتوز الذي يتخمر بواسطة بكتيريا E.coli وينتج حمض +غاز
2)استخدام أنبوبة درهام؟
يتم قلب أنبوبه درهام داخل الأنبوبة المحتوية على بيئة امرق الماكونكي وذلك للاستدلال على إنتاج الغاز
3)استخدام بيئة E.M.B في اختبار الفحص التأكيدي؟
إن فكرة الاختبار هو تكوين البيئة من معقد صبغي منEosine و Methylene Blue لايمتص إلا في الوسط لحامضي الذي توفره E.coli من تحليلها لسكر اللاكتوز الموجود بالبيئة إلى حامض يوفر الظروف المناسبة لامتصاص المعقد الصبغي
الفحص التأكيدي Completed Test:
====================
من للمستعمرات المشكوك فيها و التي أظهرت تشابها مع E.coli نقوم بتلقيح أنبوبة تحتوي على بيئة مرق ماركونكي و أنبوبة آجار مغذي مائل و تحضن على 37درجة مئوية لمدة 48 ساعة فإذا أعطانا بيئة مرق الماركونكي حامض +غاز. و من النمو على الآجار المائل نعمل فحص ميكروبي إذا كانت البكتيريا عصوية قصيرة سالبة الصبغة جرام غير متجرثمة نجزم أن الصبغة ملوثة بمياه المجاري ، و غير صالحة للشرب و لا الإستعمالات الأخرى.
http://elte.prompt.hu/sites/default/files/tananyagok/PracticalMicrobiology/book.pdf
https://www.gov.uk/government/uploads/system/uploads/attachment_data/file/316838/mdwpart1.pdf
http://www.env.gov.nl.ca/env/waterres/training/adww/qualitydist/distribution_sys2_micro_march.pdf
http://users.rowan.edu/~wagnerf/efgb/h2omicrolab.pdf
http://microbiollogy.blogspot.com/
* العوامل المؤثرة على نمو البكتيريا ونشاطها :
========================
1- درجة الحرارة:
==========
تم تقسيم البكتيريا تبعا لتحملها لدرجات الحرارة الى مجاميع مختلفة هي:
ا-محبات البرودة Psychrophililes : وتعتبر درجة الحرارة بين15-10م هي المثلى لنمو افراد هذه المجموعة.
ب- متحملات البرودة Psychrotrophic : و لهذه المجموعة القدرة على النمو في درجات الحرارة المنخفضة كاجهزة التبريد.
ج-وسطية (معتدلة) الحرارة Mesophiles : تنمو افراد هذه المجموعة بصورة جيدة في درجة حرارة 25-37 درجة مئوية وتعتبر درجة حرارة 32 درجة مؤية هي المثلى لنموها.
د-محبات الحرارة Thermophiles :الدرجة المثلى لنمو ميكروبات هذه المجموعة هي 45 درجة مئوية او فوقها.
2-الغذاء :
=====
البكتيريا كأي كائن حي يحتاج للغذاء من أجل البقاء وتأدية النشاطات المختلفة .
3-الرطوبة Moisture :
============
يطلق مصطلح النشاط المائي Water Activity (aw)لمعرفة مدى تيسر الماء للميكروبات والذي يعتمد على نسبة الرطوبة في المادة الغذائية ونسبة المواد الذائبة فيه كالسكريات والأملاح .
4- تركيز الأس الهيدروجيني pH :
===================
عندما يكون الأس الهيدروجيني 7 هو التركيز المفضل لمعظم الأحياء الدقيقة .
5- مدى توفر الأكسجين :
=============
أ- هوائية Aerobes : وهذه تحتاج لوجود الأكسجين وبتركيز كاف لنموها .
ب- لاهوائية Anaerobes : وهي تعيش وتنشط تحت الظروف اللاهوائية .
ج- لاهوائية إختيارية Facultative Anaerobs : وهذه المجموعة تعيش في وجود الأكسجين أوغيابه .
د-محبة للهواء الطفيف Microaerophiles : وهذه تتطلب نسبة قليلة من الأكسجين لكي تعيش .
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/shape.htm
بيئـات الزرع البكتريولوجي
===============
CULTUR MEDIA
*******************
إن غالبية الدراسات والبحوث البكتيريولوجيه تتطلب استعمال بيئات زرع مختلفة تحضر بالمعمل, وهذه البيئات وإن لم تكن متماثلة تماماً مع البيئات التي تعيش فيهـا أو عليهـا هذه الكائنات في الطبيعة إلا أنها قريبة الشبه منها قرباً قد يوفر الاحتياجات والمتطلبات الغذائية اللازم لتنميتها. لذا يمكن تعريف البيئة بأنها أوساط زراعية مناسبة لنمو الأحيـاء المجهريـة تتوفر فيها متطلبات النمو الأساسية, أو أي مادة يمكن أن تنمو عليها الكائنات الدقيقة.
قد تصنف أحيانـاً البيئـات إلى ..
1- بيئات محددة التركيب الكيميائي Chemically defined media :
=====================================
وهي التي تتكون من مواد ذات تركيب كيماوي محدد "بتركيزات معروفة" وعلى ذلك فهي تتكون من أملاح غير عضوية, أو مخلوط من الأملاح غير العضوية ومركبات غير عضوية, ونظراً لأن التركيب الكيماوي لكل مكونات البيئة التركيبية يكون معروفـاً ومحدداً, فإنه يمكن تكرار تجهيز مثل هذه البيئات بنفس الدقة في كل مرةٍ من مرات التحضير.
2- بيئات غير محددة التركيب الكيماوي Chemically nodefined method :
===========================================
هي التي تحتوي على مايلزم نمو الميكروبات من مواد بشكلها الخام, مثل البيئـات التي يدخل في تركيبها المواد الطبيعية كمستخلص اللحم, الدم, أو مستخلص الأنسجة النباتية, ولما كان التركيب الكيماوي الدقيق لمثل هذه المواد غير محدد بمعنى أن جميع مكونات البيئة وكمياتها غير معروفة بالضبط وتختلف باختلاف المادة الطبيعية المستعملة كان من الصعب تكرار تحضيرها عمليـاً.
ويمكن تقسيمهـا على أسـاس قوامهـا إلى:
======================
1- بيئات صلبة "طبيعية" Solid media :
=====================
مثل شرائح البطاطس أو الجزر.
2- بيئـات صلبة قابلة للإسالة Solid-reversible to liquid :
================================
مثل البيئات التي يدخل في تركيبها الآجار أو الجيلاتين, وتستخدم لتمييز المستعمرات.
3- بيئـات نصف صلبة Semisolid media :
========================
وهي التي تحتوي على كمية من الآجار لا تزيد عن ربع الكمية التي تضاف إلى البيئـات الصلبة القابلة للإسالة.
4- بيئـات سائلة Liquid media :
==================
مثل بيئة اللبن أو بيئة المرق المغذي, وتستخدم لتنمية الميكروبات المعزولة بصورة نقية. بالإضـافة إلى ذلك توجد بيئات ذات أغراض خاصة لسهولة تنمية وعزل مجموعات معينة من البكتيريا مثل:
1- الأوساط الغنية Enriched media :
=====================
وهي أوساط عادية بسيطة مضافاً إليهـا مواد غذائية غنية مثل الدم, المصل, مستخلصات النباتات أو الحيوانات لمواجهة متطلبات النمو الصعب الإرضـاء مثل
Serum agar – Milk agar – Blood agar
2- الأوسـاط الاختيارية Selective media :
=======================
مثل إضافة بعض المواد بتركيز معين كالصبغات, أملاح الصفراء, المضادات الحيوية, الأحماض للسماح بنمو مجموعة من البكتيريا دون غيرهـا كإضـافة صبغة الكريستال البنفسجي بتركيز معين يؤدي إلى نمو مختلف أنواع البكتيريا السالبة لصبغة جرام ويمنع نمو البكتيريا الموجبة
3- الأوساط المفرقة Deferential media :
======================
هي الأوساط التي تسمح بنمو نوعين من البكتيريا يمكن التمييز بينهما, مثل بيئة آجار الـدم فبإضافة الدم إلى الوسط الزراعي يسمح بتمييز البكتيريا المحـللة للدم وغير المحـللة, حيث تظهر حلقة فارغة حول المستعمرة المحـللة, وبذا تلعب الأوسـاط المحتوية على الدم دور الوسيط الغني المفرق في الوقت ذاته.
4- بيئـات التقدير الحيوي Biological assay media
5- بيئـات عد البكتيريا Media for eneumeration of bacteria
6- بيئـات التعرف على البكتيريا Media for characterization of bacteria
المكونات الأساسية للأوسـاط الزراعية:
===================
تشترك معظم الأوسـاط الزراعية في احتوائهـا على المواد التاليـة:
الببتـون
====
يعتبر مصدراً هامـاً للنتروجين العضوي في البيئـات المعدة لتنميـة البكتيريـا غير ذات التغذيـة, يحضر من اللحم الخلي من الدهون بعد تحلله بـإنزيم الببسين.
خلاصـة اللحم Beef extract
================
تحضر من اللحم البقري الخـالي من الدهـون بعد غليـه وترشيح الخلاصـة وتركيزهـا, يحتـوي المستخلص على بعض الأحمـاض غيـر العضويـة وبعض المواد العضويـة مثل الأحمـاض الأمينيـة, الجلوكوز, اليوريـا, حامض اللكتيـك, الفيتـامينـات, عوامـل النمـو الأخرى.
خلاصة الخميـر Yeast extract
==================
تحتوي على بعض الأحمـاض الأمينيـة, وبعض العوامـل المسـاعدة للنمو, وأملاح معدنيـة.
المـاء Water-
========
تحتـاج الخلايـا الحيـة إلى المـاء لنموهـا ولإتمـام عملياتهـا الأيضيـة, وعلاوة على استخدامه كمـادة مذيبـة للمواد الغذائيـة, ويفضـل استخـدام المـاء المقطر لخلوهـا من الأملاح المعدنيـة.
المواد التصليبيـة Solidifying agents :
======================
تضاف إلى بيئـة الزرع السـائلة بعض المواد لتسـاعدهـا على تحولهـا إلى بيئـة صلبـة تسـاعد على تكويـن مستعمرات فرديـه.
وفيمـا يلي بعض المواد التصليبية التي تضـاف إلى بيئـات الزرع ..
الجيلاتيـن
======
أول ما استعمل كمـادة تصليبية في بيئـات الزرع, وهو عبـارة عن مادة بروتينيـة تحضر بمعاملة عظام الحيوانات, ويندر حاليـاً استعمـال الجيلاتين كمادة تصليبية في البيئـة نظـراً لأن كثيـر من البكتيريـا يمكن تحليله مائيـاً, ولأنـه ينصهـر عند درجـات التحضيـن.
الآجار آجار Agar agar
==============
مادة كربوهيدراتيه تستخلص من بعض الطحالب البحريـة الحمراء, والتي تنمو بوفرة على سواحل بعض الدول مثل اليابـان, وهو يتصلب عند درجـة حرارة من 42- 45م, ويمكن إسـالته مرة ثانيـة عند درجـة حرارة 98م, ويتميـز عن الجيلاتيـن كونـه لا يمكن تحليلـه بيولوجيا لأن عدد الكائنـات المحللة له قليلـة جداً.
السليكـا Silica-
=======
لا تعتبر مادة غذائيـة فهي عادة تستعمل في تحضير البيئـات اللازمـة لتنميـة الكائنـات الذاتيـة التغذية, وذلك لمنع نمو البكتيريـا غير ذاتية التغذيـة معهـا
*عزل الأحياء الدقيقة من بيئاتها الطبيعية*
من المعروف أن الكائنات الحية الدقيقة التي تستوطن هذة البيئة التي نعيش فيها، على درجة كبيرة من التعقيد من حيث اختلاف أنواعها إضافة إلى أعدادها الهائلة، اذ يقدر عدد أنواع الميكروبات التي تستوطن مختلف أجزاء جسم الإنسان مثل سطح الجلد، الفم، الأمعاء…الخ بعدة مئات. وينتشر كل نوع من هذة الأنواع بأعداد كبيرة جدا تصل للآلاف فعلى سبيل المثال عندما يعطس الفرد منا، فانه يطلق مع الرذاذ المتطاير بضعة الآلف من الخلايا البكترية، كما أن جراما واحدا من الفضلات الآدمية (البراز) يحتوي على مئات الآلاف من خلايا البكتريا. وبخلاف جسم الإنسان فان مكونات البيئة التي نعيش فيها مثل الماء،و الهواء، والتربة تعج بأعداد هائلة جدا من مختلف أنواع هذة الميكروبات . ويرجع انتشارها الكبير إلى صغر حجمها المتناهي مما يسهل حملها بالتيارات الهوائية مع جزيئات البيئة الموجودة فيها.
عمل شريحة بصبغة جرام :
=============
1. نعقم تعقيم فيزيائي كيميائي (غسل الشريحة ومن ثم تجفيفها بتمريرها على اللهب)
2. نضع نقطة ماء لتحطيم الغشاء
3. نعقم الإبر ونأخذ مسحة من المستعمرة.
4. نضع ونفرد المسحة على الشريحة وهذا يسمى عمل غشاء.
5. نمرر الشريحة على اللهب حتى يجف الماء وهذا يسمى تثبيت الغشاء.
6. نغمر الشريحة في صبغة كريستال البنفسجية لمدة دقيقة واحدة حتى نصبغ الغشاء.
7. نغسل الشريحة حيدا بالماء حتى يزول اللون البنفسجي
8. نضع الشريحة في اليود لمدة دقيقة واحدة ( يعتبر مرسخ للصبغة)
9. ثم نغسل بالماء.
10.ثم نغسل الشريحة بالكحل جدا إمالة الشريحة حتى تزول الصبغة :الكحول عامل مزيل للون الصبغة.
11. نغسل بالماء
12. نضع الشريحة على الصفرانين : وهي الصبغة المضادة.
13. نغسل بالماء.
14. نجفف بورق الترشيح بالضغط.
15. نجفف على اللهب حتى تجف تماما.
16. نضع نقطة من زيت السدر.
17. نفحص على ميكروسكوب على 10 حتى نرى الغشاء ثم 100عدسة زيتية بطريقة ملاصقة للعدسة.
معلومة :
أن البكتيريا السالبة لصبغة جرام تظل باستمرار سالبة لهذه الصبغة, إلا أن البكتيريا الموجبة يمكنها
تحت ظروف خاصة أن تفقد ايجابيتها لبعض الأسباب التالية :
1. عندما تتقدم الخلايا في العمر
2. عند ارتفاع حموضة البيئة
3. عند المعاملة بإنزيم Ribowclease
4. إذا سحقت الخلايا مع برادة الزجاج لتكسير جدرها فإن بقايا الخلايا المهشمة تفقد إيجابيتها.
*عزل البكتريا في مزارع نقية:
================
توجد طريقتين رئيسيتين يمكن بواسطتها الحصول على مزرعة نقية من أخرى مختلطة وهما:
أولا: طريقة الأطباق المخلوطة Streak-plate method .
1- عقم سطح البنش باستعمال قطعة قطن مبللة بالديتول 70%.
2- اصهر أنبوبتين من الاجار المغذي العميق على درجة الغليان ثم بردها حتى 50م .
3- صب الاجار المغذي في أطباق ثم اتركها حتى تتصلب.
4- من المزرعة المختلطة وبطريقة معقمة لقح بإبرة تلقيح معقمه الطبق رقم (1) ثم لقح الآخر بنفس الإبرة بدون تعقيمها وبدون وضعها في المزرعة المختلطة مرة أخرى وذلك في التخطيط البسيط.
5- حضن على درجة الحرارة المناسبة وادرس صفات المستعمرات المزرعية.
ثانيا: طريقة الأطباق المصفوفة Pour plate method.
1- اصهر 2 أنبوبه من الاجار المغذي واتركها لتبرد حوالي 50م.
2- بطريقة انقل ملء عقدة من المزرعة المختلطة مستخدما إبرة تلقيح معقمة إلى أنبوبة رقم (1) ثم رجها بين راحتي اليد.
3- بطريقة معقمة مستخدما إبرة تلقيح جديدة انقل ملء عقدة من الأنبوبة رقم (1) إلى الأنبوبة رقم (2) ثم رجها بين راحتي اليد.
4- صب الأنبوبة رقم (1) في طبق رقم (1) , ثم صب الأنبوبة رقم (2) في الطبق رقم (2).
5- اترك الأطباق حتى تتصلب وحضنها مقلوبة على درجة حرارة مناسبة.
6- من المحتمل بعد فترة التحضين أن يظهر بالطبق رقم (1) عدد كبير من المستعمرات بينما الطبق رقم (2) يظهر عدد قليل من المستعمرات المفردة المنعزلة عن بعضها بطريقة تمكننا من عزل كل نوع في صورة نقية .
وقد لوحظ أن البكتريا التي تنتج مستعمرات مخاطية Mucoid يكون فصلها صعب عن غير المخاطية Nonmucoid بطريقة الأطباق المخلوطة ,ولكن يمكن فصلها بطريقة الأطباق المصبوبة.
الصفات المزرعية لمستعمرات البكتيريا
===================
تشمل الصفات المزرعية للكائن البكتيري المظهر المرئي بالعين المجردة للنمو فوق أو في بيئات مختلفة . والهدف من دراسة الصفات المزرعية لمستعمرات البكتيريا هو التعرف على أنواع البكتيريا المختلفة.
ويمكن تقسيم الصفات المزرعية للبكتيريا إلى:
أولا : الصفات المزرعية عند نمو البكتيريا على البيئات الصلبة
1. شكل المستعمرة
• نقطية
• دائرية
• خيطية
• غير منتظمة
• جذرية
• مغزلية
2. ارتفاع المستعمرة
• مسطحة
• مرتفعة
• محدبة
• كثيرة التحدب
• مرتفعة المركز
3. شكل حافة المستعمرة
• كاملة
• مموجة
• مفصصة
• مسننة
• مجعدة
• خيطية
4. سطح المستعمرة
• ناعم
• خشن
5. الصفات الضوئية للمستعمرة
• معتمة: لا تسمح للضوء بالمرور خلالها.
• نصف شفافة: تسمح للضوء بالمرور خلالها ولكن لاتسمح بالرؤية الكاملة للأشياء خلفها.
6. قوام المستعمرة
• زبديا
• لزجا
• غشائيا
• هشا
7. لون المستعمرة
(أ) تفرز بعض البكتيريا صبغات غير ذائبة في الماء تلون المستعمرات ولاتلون البيئة وقد تكون لون المستعمرات أصفر أو أحمر أو........الخ ومن أمثلتها البكتيرياXanthomonas التي تظهر مستعمراتها باللون الأصفر.
(ب) كما تفرز بعض البكتيريا الأخرى صبغات ائبة في الماء تلون البيئة ولا تلون المستعمرات مثل بعض أنواع الجنس Pseudomonas والتي تفرز صبغة فلوريسينية ذائبة في الماء لونها أخر مصفر.
ثانيا: وصف النمو البكتيري على بيئة الأجار المغذي المائل
1. كمية النمو البكتيري
• ضئيل
• متوسط
• غزير
2. شكل النمو
• محزز
• شجري
• غشائي
• جذري
• مفكك
• شوكي
3. الرائحة
أ- ليس له رائحة
ب- اذا وجدت رائحة يذكر مدى تشابهها لأي روائ معروفة
ت-
ثالثا: وصف النمو البكتيري في بيئة المرق المغذي
========================
1. النمو على سطح المنبت
أ- لايوجد نمو سطحي
ب- حلقة محيطة بالسطح
ت- قشرة رقيقة تغطي السطح
ث- نمو سطحي متجمع (كتل بكتيرية ملتتصقة ببعضها تطفو على السطح)
ج- نمو غشائي سميك
ح-
2. النمو تحت السطح
• لايوجد نمو
• عكر
• حبيبي
3. النمو المترسب
• لايوجد راسب
• راسب حبيبي
• راسب متكتل
• راسب لزج
• راسب قشري
الخواص المزرعيه لمستعمرات البكتيريا
عمر الزرع....................
النمو: بطيئ_سريع_متوسط
أولا:وصف النمو البكتيري على بيئه الاجار المغذي
1-شكل المستعمره
أ- نقطية ب- دائريه ج- خيطيه د-غير منتظمه هـ - جذرية و- مغزلية
2_ارتفاع المستعمره
أ- مسطحه ب- مرتفعه ج- محدبه د- كثيرة التحدب هـ - مرتفعه المركز
3_شكل حافة المستعمره
أ- كاملة ب- مموجة ج-مفصصة د-مسننة هـ - مجعدة وخيطية
4_سطح المستعمره
أ- ناعم ب- خشن
5_ الصفات الضوئيه للمستعمرة
أ- معتمة ب- نصف شفافة
6_ قوام المستعمره
أ- زبديا ب- لزجا ج-غشائيا د-هشا
7_لون المستعمرة...............
ثانيا:وصف النمو البكتيري على بيئه الاجار المغذي المائل
1-كمية النمو البكتيري
أ- ضئيل ب- متوسط ج-غزير
2_شكل النمو
أ- محزز ب- شجري ج- غشائي د- جذري هـ - مفكك و-شوكي
3_ الرائحة
أ- ليس له رائحة ب-اذاوجدت رائحه يذكر مدى تشابهها لأي روائح معروفة
ثالثا:وصف النمو البكتيري في بيئه المرق المغذي
=========================
1_النمو على سطح المنبت
ا-لايوجد نمو سطحي ب- حلقه محيطة بالسطح ج-قشرة رقيقه تغطي السطح
د-نمو سطحي متجمع(كتل بكتيريه ملتصقه ببعضها تطفو على السطح)
هـ - نمو غشائي سميك
2_النمو تحت السطح
أ-لايوجدنمو ب-عكر ج- حبيبي
3_النمو المترسب
أ-لايوجد راسب ب-راسب حبيبي ج- راسب متكتل د-راسب لزج هـ - راسب قشري
Bacterial Growth curve (cycle) اطوار النمو البكتيري
1. طور الركود او التأقلمLag phase
ويبدأ هذا الطور عند وصول البكتيريا الى بيئة جديدة ، فلا تبدأ الخلية البكتيرية في الانقسام والتكاثر ، بل تعمل على التاقلم مع هذا الوسط الجديد فيكون عددها ثابتا .
2. طور النمو اللوغارتيمي (النمو السريع) Logarithmic Growth Phase
وخلال هذا الطور تكون البكتيريا قد تأقلمت مع البيئة الجديدة .
3. طور الانقسام الثابت Stationary phase
يكون الانقسام محدوداً وتكون أعداد البكتيريا الميتة متساوياً مع أعداد البكتيريا الحية .
4. طورالموت او الانحدار Death (Decline) Phase
و في هذا الطور يستمر نقص الغذاء مع ازدياد المواد السامة في البيئة المحيطة بالبكتيريا.
1- طورالركود.
2- طور النمو السريع .
3- طور الانقسام الثابت.
4- طور الموت او الانحدار.
الميكروبية العالمية:
==========
المستعمرات البكتيرية، صبغة الجرام التفاعل واشكال الخلايا
===============================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/shape.htm
========================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/myxococc.htm…
==============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/xanthan.htm#Top
============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/bt.htm#Top
=======================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/airborne.htm…
============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/winograd.htm…
=============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/cyano.htm#Top
===========================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/index.htm…
============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/proteus.htm#Top
============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/control.htm#Top
============================================
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/penicill.htm…
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/thermo.htm#Top
http://archive.bio.ed.ac.uk/jdeacon/microbes/nitrogen.htm
دراسة عن جودة مياه الشرب بمدينة الرياض
========================
http://www.building-tech-mag.com/researches/14/derasat-an-jawdat-meyah.pdf
تحاليل الماء بكتريولوجيا
============
طريقة الانبوب المتعدد
=============
تعتبر واحدة من أقدم الطرق المستخدمة. في هذه الطريقة العينة (تقريبا 10 ميلي) يتم تخفيفها بإضافة 100 ميلي من وسط زراعي معقم. يتم اخذ عينة من هذا المحلول (10 ميلي) وتوضع في عشرة انابيب. العشرة ميلي الأخيرة يتم تخفيفها وتم عمل نفس العملية مجدداً. بعد الانتهاء من تكرار هذه العلية ل خمس مرات سيصبح عدد اللانابيب 50 انبوب والتخفيف سيبدا من 1:10 إلى 1:10000. بعد ذالك، تتم عملية حضانة للانابيب في درجة حرارة معينه ووقت محدد ثم يتم حساب عدد الانابيب التي حصل في نمو. باستخدام الجداول الاحصائية يتم تحديد تركيز الميروكبات في العينة الاصلية (قبل التخفيف). هذه العملية يكمن أن تطور باستخدام وسط زراعي يحدد إنتاج الحمض بتغير لون الوسط وأيضا باستخدام انبوبة مقلوبة للاكتشاف الغاز المنبعث. الغاز المنبعث يعتبر محدد قوي لوجود إشريكية قولونية.
اختبار ثلاثي فوسفات الأدينوسين ثلاثي فوسفات الأدينوسين
=============================
اختبار ثلاثي فوسفات الأدينوسين يكون عملية قياس سريعة للميكروبات النشطة في الماء عبر الكشف عن ثلاثي فوسفات الأدينوسين أو ATP. ثلاثي فوسفات الأدينوسين هو جزيء يوجد فقط في وحل الخلايا الحية وهو يعطي قياس مباشر للتركيز الحيوي والصحي.يتم قياس كمية ATP عن طريق الضوء الصادر عبر تفاعله مع انزيم ليوسيفيريز Luciferase عن طريق Luminometer. كمية الضوء الصادر تعبر عن كمية الطاقة الحيوية الموجودة في العينة. الجيل الثاني من اختبارات ATP صممت خصيصا للماء، مخلفات الماء والاستخدامات الصناعية.
عد الطبق
======
طريقة عد الطبق تعتمد على نمو البكتيريا على شكل مستعمرة على وسط مغذي. المستعمرة يمكن مشاهدتها بالعين المجردة وبالتالي يتم عد المستعمرات الموجودة في الطبق. للفاعلية، يتم تخفيف العينة لتصبح عدد المستعرات حوالي 30 -300 مستعمرة في الطبق. اقل من 30 مستعمرة تعتبر غير كافية للعد وأيضا أكثر من 300 مستعمرة تجعل من عملية العد أكثر صعوبة. لذالك عدة تخفيفات يجب أن تعمل للعينة للحصول على عدد مناسب من المستعمرات للعد. التجربة المخبرية تشمل تخفيف العينة بشكل تسلسلي (1:10 ,1:100 ,1:1000 etc) في ماء معقم وتطعيمها على اجار مغذي في طبق يكون مغلق ومن ثم تتم حضانته. الأوساط النموذجية تشمل اجار عد الطبق للعد العام Plate count agar وماكونكي اجار MacConkey agar لعد بكتيريا سالبة صبغة جرام على سبيل المثال إشريكية قولونية. مجموعة أولى من الاطباق تحضن عند 22 °C لمدة 24 ساعة والمجوعة الثانية عند 37 °C لمدة 24 ساعة. تركيب المغذي عادةً يتضمن على مواد تقاوم نمو الميكروبات الغير مستهدفة ويجعل الميركوبات المستهدفة سهلة التعرف وعادةً بواسطة تغير لون الوسط. بعض الطرق الحديثة تحتوي على عامل مضيء والتي يجعل عملة العد بشكل آلي. في نهاية فترة الحضانة، يتم عد المستعمرات بالعين المجردة.
غشاء الترشيح
=======
يتم ترشيح الانابيب التي تحتوي على التخفيفات المتسلسلة على غشاء الترشيح ومن ثم هذه الاغشية توضع على الوسط المغذي داخل الطبق.هذه الطريقة تعير مشابهه ل طريقة عد الطبق الكامل التقليدية هذي الاغشية تحتوي على شبكة من الفتحات الصغيرة (ميليمتر).ويمكن ان تعد مستعمرات أكثر باستخدام المجهر.
سكب الاطباق
======
عندما يكون الهدف هو البحث عن أنواع البكتيريا التي تنمو بصورة ضعيفة في الجو، التحليل المبدئي يعمل بواسطة مزج تخفيفات متسلسلة من العينة في اجار مغذي سائل وهو الذي يسكب في قوارير ثم يتم اغلاقة ويوضعون على اجنابهم ليتم تكون اجار السطح المائل.المستعمرات التي تظهر على الوسط يمكن عدها بواسطة العين المجردة. العدد الكامل من المستعمرات يمثل العدد الحيوي الكامل.وحدة القياس تكون cfu/ml أو وحدات المستعمرات المتكونة في ميلي متر وتربط بالعينة الأساسية.عملية الحساب تكون بضرب معامل التخفيف في عدد المستعمرات.
انواع الأوساط المغذية المستخدمة في التحليل
=======================
اجار ماكونكي MacConkey agar
=======================
عبارة عن وسط زراعي صمم لنمو بكتيريا سالبة صبغة جرام وتختلف لون المستعمرات وفقاً إلى الاستجابة إلى تخمر الاكتوز. تحتوي أيضاً على أملاح الصفراء (يثبط نمو بكتيريا موجبة صبغة جرام)، صبغة crystal violet (أيضا يثبط نمو بكتيريا موجبة صبغة جرام) ,صبغة neutral red (يصبغ البكتيريا المخمره للاكتوز)، لاكتوز وببتيد.
الوسط ENDO يحتوي على ببتيد ولاكتوز ,Dipotassium phosphate، اجار، كبريتيت الصوديوم، basic fuchsin وكان تم تطويره لعزل Salmonella typhi لكنه الآن يستخدم في تحليل الماء.كما في اجار ماكونكي ,ميكروبات coliform تخمر الاكتوز ولون المستعمرة يصبح احمر. الميكروبات التي لا تخمر الاكتوز يصبح لون المستعمرة عديم اللون.
وسط mFC
=======
يستخدم في عملية غشاء الترشيح الذي يحتوي على عوامل محددة ومفرقة. أحد هذه العوامل يكون Rosolic acid الذي يثبط نمو البكتيريا عدا coliforms البرازية، الأملاح الصفراء تثبط البكتيريا non-enteric و Aniline blue يحدد مقدرة coliforms البرازية على تخمير الاكتوز وإنتاج الحمض الذي يغير من PH الأس الهيدروجيني للوسط.
وسط TYEA
========
يحتوي على Tryptone، Yeast extract وأملاح عامة و L-arabinose.يعتبر ليس وسط اختاري وعادةً ما يتم تصطيمه عند درجة حرارة(22c and 36 °C) لتحديد المستوى العام من التلوث.
الأختبارات الواجب عملها فى عينة مياه الشرب حسب المواصفات القياسيه المصريه:
===========================================
1- Total plate count at 37°C/ 24h
2- Total plate count at 22°C/ 48h
3- Total Coliform
4- E.coli
5- Faecal streptococci
==================================
مشروع دعم قطاع مياه الشرب و الصرف الصحي
http://pdf.usaid.gov/pdf_docs/Pnady300.pdf
تحليل المياه
======
https://tools.thermofisher.com/content/sfs/brochures/BR-70541-Water-Quality-Analysis-BR70541-EN.pdf
أضيف بتاريخ 09 نوفمبر 2020 الساعة 3:15 مساء 
عدد القراء 919
